Sokáig nem tudta a világ, milyen izgalmas, tarkabarka élet zajlik egy múzeumban zárás után. Egy kezdő múzeumőr, Larry Daley (Ben Stiller) kellett hozzá - azóta a múzeum nem poros tárlókat és unalmas, udvarias álldogálást jelent, hanem kalandot, veszélyt és játékot. De a New York-i Természettudományi Múzeum és a washingtoni Smithsonian még nem volt minden. Az éjjeliőr újra felveszi egyenruháját és övére akasztja a tekintélynövelő nagy zseblámpát. A látogatók hazamennek, egy múzeum bezárt: kezdődhet az új kaland!